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添加日期:2020-11-24   來源:PSY應用研究院   閱讀次數:3730
    非洲豬瘟病毒,根據其致病力的不同,可分為高致病性、中等致病性和低致病性三類。高致病性毒株能造成嚴重的急性病症,並在感染後4-15天達到90-100%的死亡率;中等毒性的毒株死亡率在30-70%;低致病性毒株的死亡率在10-30%。
 
    中低等級感染後存活下來的豬是否長期帶毒並向外界排毒,這是長期爭論的焦點。德國弗裏德裏希·勒夫勒研究院診斷病毒所的研究人員給出了自己的實驗結論。
一.實驗設計
 
    實驗中,研究人員選取了36頭非瘟病毒檢測陰性、非瘟抗體檢測陰性的5-6月豬,其中30頭作為攻毒豬,用分離於荷蘭的中等毒性的 Netherlands’86 毒株通過病毒培養上清液滴鼻的方式進行接種感染,稱為C型豬。C型豬隨機分為三組,每組10頭,分別關在一個豬舍三個獨立的大欄中。
 
    剩餘6頭不接種病毒,用於在C型豬感染後期與其同欄飼養,檢測感染後期C型豬的感染能力,稱為S型豬。
    感染後,C型豬每天檢測直腸溫度並觀察臨床現象。如果溫度兩天以上達到40度,則確認為發燒。臨床觀測症狀包括:活潑度、耐受度、呼吸頻率、步態、皮膚、眼睛、臉頰和采食量等,並建立評分係統。
 
    為了評判感染後豬隻病毒血症、排毒和免疫應答的程度,在感染第3,7,10,14,20,29,42,48,63和91天抽取前腔靜脈血進行化驗。
同一時間,為了檢測感染豬隻排毒情況,用棉簽拭子收集包括糞便樣品、唾液和口咽部樣品在內的拭子樣品,用作qPCR檢測。從105天到126天,拭子樣品每周收集一次。
    99天後,幸存的19頭C型豬與6頭S型豬混養,每組放2頭S型豬,並按原本實驗設計收集各類檢測樣品。164/165天後,所有存活的C型豬和S型豬解剖采集組織樣品檢測,包括:扁桃體、唾液腺、脾髒、肺髒和下頜淋巴結,以及腹股溝、肝、腎、腸胃、肺等多處淋巴結。
    所有拭子樣品、血液樣品和組織樣品中病毒的都要用實時定量PCR檢測,抗體用ELISA檢測。為了檢測血液和組織中有活性的病毒,應用血細胞吸附實驗檢測。
二.實驗結果
 
01臨床症狀
 
    中等毒性的 Netherlands’86毒株感染後的C型豬表現出多種不同臨床症狀,包括急性致死、延遲致死、慢性病症,以及最終恢複等。
    多數豬隻在感染4-6天,出現發燒症狀。在急性死亡的豬隻身上,臨床症狀表現為萎靡不振、結膜炎、不采食、便秘、皮膚變紅,特別在耳朵和眼睛區域;發燒41.8℃,一些豬在高燒5天後出現中樞神經障礙症狀。急性症狀平均持續8-10天。該階段死亡的豬,解剖發現多個髒器出血:外周淋巴結腫脹和出血,腎髒出血點和肺部水腫。
02病毒檢測
 
    所有30頭C型豬在滴鼻感染一段時間後,抽血做qPCR檢測都檢出陽性,第一次檢測出陽性的時間在感染後3-21天之間。在第10和14天,血液中病毒含量最大。在感染第42天,6頭C型豬第一次qPCR檢測結果呈陰性,第48天7頭,第63天10頭結果陰性。到了第91天,盡管52%的C型豬仍舊陽性,但病毒載量降低了(Cq 28-30)。
同時間的30頭C型豬血樣HAT檢測(HAT檢測陽性說明ASFV有感染活性)發現,血清HAT檢測結果與血液PCR結果一致,大多數HAT檢測陽性結果出現在14天感染。有趣的是,HAT第一例陰性結果出現在29天,隨後大量存活的C型豬出現HAT陰性,到了第63天所有存活的C型豬檢測陰性。這可能表明存活的非瘟感染豬喪失感染能力要早於核酸檢測陰性結果出現。
    棉簽拭子采樣檢測結果顯示感染ASFV的C型豬排毒情況。口腔拭子樣品qPCR檢測在感染第3天出現陽性結果(兩頭豬)。在第7和10天,絕大多數的口腔拭子樣品出現陽性(Cq在30-41間)。從第14天開始,陽性拭子樣品數量開始減少,到第21和29天,隻有1個樣品呈現陽性,到了第42天,所有的口腔拭子樣品呈現陰性。唾液樣品與口腔拭子結果一致,在7-10天出現陽性結果高峰,在14天開始減少。不同的是,唾液樣品病毒載量更多,持續時間更長。糞便樣品中的病毒含量更低,最後的陽性樣出現在第29天。
    ELISA檢測感染豬抗體情況。第一批可疑結果(5頭)和陽性結果(13頭)在感染後第13天出現,隨後抗體陽性豬數量和抗體阻斷率穩定增加(增大)。到了第29天,所有C型豬抗體顯示陽性(阻斷率在74-98%),到了第63天,所有C型豬阻斷率達到99-100%。存活的C型豬直到實驗結束仍表現陽性,但是產生的抗體是ASFV p73蛋白特異性的抗體,但不能產生有中和作用的抗體。
 
    6頭S型豬從實驗開始至結束,未表現非瘟感染臨床症狀,qPCR檢測、HAT檢測和ELISA檢測結果均呈陰性,表明在第99天,S型豬和感染非瘟後存活C型豬混養,C型豬已不具備感染能力。
綜上,中等毒性的Netherlands’86毒株感染後的豬隻在4-6天內既出現臨床症狀,並且嚴重程度各異,包括急性致死、延遲致死、慢性病症,以及最終恢複等。在感染幾天(最早3天)後便出現病毒血症,可通過PCR、HAT試驗等方法檢測,同時開始出現排毒,第3天口腔及唾液中就可檢測病毒,糞便中稍晚;ASFV抗體(p73特異性抗體)出現更晚。然而存活下來的感染豬隻並不會長期帶毒,而是隨著時間的推移,病毒載量逐漸降低,並最後完全清除。HAT試驗陰性結果最先出現,隨後qPCR結果也將轉為陰性,健康豬隻與感染99天後的存活感染豬混養也不會出現感染。但存活下來的感染豬並不會產生有效的中和抗體。
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